i)操作法 |
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試料1) 1 ml(g) |
↓ |
i)0.01 N HCl 4 mlを加えて混和あるいはホモジナイズする.
ii)酢酸エチル 5 mlおよび炭酸アンモニウム(Ammonium carbonate)粉末 1.5 gを加える.
iii)10分間振盪後,3,000 rpmで10分間遠心する. |
酢酸エチル層 |
↓ |
i)0.1 N HCl 2.0 mlを加える.
ii)10分間.振盪後,3,000 rpmで10分間遠心する. |
塩酸層 1.8 ml |
↓ |
i)酢酸エチル 0.8 mlおよび 0.2 N NaOH液 1.0 mlを加える.
ii)10分間振盪後,3,000 rpmで10分間遠心する. |
残渣 |
↓ |
酢酸エチル 20 μlに溶かし,その 1 μlを注入する. |
GC-NPDあるいはGC/MS |
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【注 解】 |
1) |
試料は血清,血液,尿,胃内容物あるいは組織.試料量により,抽出操作スケールの変更可能. |
2) |
本抽出法は塩基性薬毒物の定量分析に適用できる.その際の内部標準物質には,分析対象物質の類縁化合物あるいは重水素標識体を用いる. |
3) |
0.1 N 塩酸による逆抽出および酢酸エチルによる再抽出の際,水層のpHが正しく酸性あるいはアルカリ性になっていることをpH試験紙で確認する. |
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ii)GC-NPDおよびGC/MSの操作法および条件 |
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GC-NPDおよびGC/MSの操作法は各機器の取り扱い説明書を参照. |
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GC-NPDおよびGC/MSの条件は中・酸性および塩基性薬毒物(固相抽出)と同じ.ただし,ハロペリドール,トリアゾラムのように治療レベルが低く,かつ保持時間が長い化合物が想定されるときには,以下の条件で行う. |
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GC-NPD の条件 |
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装置: |
ガスクロマトグラフ |
検出器: |
NPD(FTD)(窒素-リン検出器) |
カラム: |
DB-5ms,10 m×0.25 mm i.d.,膜厚 0.25 μm |
カラム温度: |
カラム 150℃(1 min,スプリットレス)-(30℃/min)-300℃(9 min);
注入部 290℃,検出器 300℃ |
キャリアガス: |
ヘリウム 1.0 ml/min |
メイクアップガス: |
40 ml/min |
測定時間: |
12 min |
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GC/MS の条件 |
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装置: |
ガスクロマトグラフ/質量分析計 |
カラム: |
DB-5ms,10 m×0.25 mm i.d.,膜厚 0.25 μm |
カラム温度: |
カラム 150℃(0.5 min,スプリットレス)-(30℃/min)-300℃(9 min);
注入部 290℃,インターフェース・イオン源 260℃ |
キャリアガス: |
ヘリウム 1.0 ml/min |
イオン化: |
EI(電子衝撃),70 eV |
測定時間: |
質量範囲 m/z 50-650;時間 12 min |
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iii)コメント |
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本法は逆抽出および再抽出操作を含むので十分クリーンな抽出物が得られ,回収率もほぼ満足できるが,主として化合物の pKa 値の違いに起因する回収率の変動は避け得ない.本法では抽出に炭酸アンモニウム(Ammonium
carbonate), 0.1 N HCl,0.2 N NaOH液および酢酸エチルを用いているが,これらは他の試薬,緩衝液および溶媒に変更できる.
スクリーニングおよび確認については中・酸性および塩基性薬毒物(固相抽出)のコメント参照. |