i)誘導体化 |
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酢酸エチル層*あるいは溶出液**2) |
↓ |
酢酸1滴を添加した後,窒素気流下,0.1 mlまで濃縮する. |
濃縮液3) |
↓ |
i) 10 ml炭酸ナトリウム/炭酸水素ナトリウム緩衝液(pH 9.0)1.1 ml,1.0 mMダンシルクロリド/アセトン溶液0.9 mlを加え,混和する.
ii) 45℃で1時間加温する. |
反応液 |
↓ |
直ちに冷水下におき,20 μlをHPLCに注入する. |
HPLC |
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【注 解】 |
1) |
抽出はガスクロマトグラフィーの項の液-液抽出および固相抽出に従って行う. |
2) |
GC,GC/MSの項,液-液抽出の酢酸エチル層あるいは固相抽出の溶出液. |
3) |
誘導体化を行わない場合は,乾固した残渣をそのまま移動相に溶解し,分析試料とする.誘導体化を行う場合は,上記の手順をとる. |
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ii)HPLCの条件(非誘導体化) |
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装置:
検出器:
カラム:
移動相:
カラム温度:
流速:
測定: |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
Finepak SIL C18T1), 25 cm×4.6 mm i.d. 粒径 5 μm
アセトニトリル/0.05 M 酢酸アンモニウム-0.2%酢酸(1:1,v/v)2)
室温
1.0 ml/min
波長 254 nm; 時間 25 min |
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【注 解】 |
1) |
ODS (オクタデシルシラン系シリカゲル).近年,塩基性化合物専用のカラムや光学分割カラムなど,多種のカラムが市販されており,各社のアプリケーションデータを参考にして使い分けると便利である. |
2) |
移動相は,酢酸アンモニウム3.85 gおよび酢酸2 mlに水を加えて1,000 mlにした溶液と,アセトニトリルとを1:1 (v/v) の割合で混合する.移動相として,メタノール系も使用されているが,一般にメタノール系はカラム内圧が高くなるため,カラムの寿命を短くする. |
3) |
MAの検出下限は 1μg/ml である. |
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【文 献】 |
1. |
高山成明 他.衛生化学 1984;30:14-18. |
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iii)HPLCの条件(誘導体化) |
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装置:
検出器:
カラム:
移動相:
カラム温度:
流速:
測定: |
高速液体クロマトグラフ
蛍光検出器
Spheri-5RP-18, 3 cm×4.6 mm i.d.(ガードカラム)
+ Inertsil ODS-2, 25cm×4.6 mm i.d.
アセトニトリル/1 mM イミダゾール液(pH 7.0)(7:3,v/v)1)
室温
1.0 ml/min
波長Ex(励起)470 nm, Em(蛍光)530 nm; 時間 約25 min |
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【注 解】 |
1) |
移動相は,イミダゾール68 mgを水に溶かして1,000 mlとし,酢酸でpHを7に調整する.pHを調整した水溶液と,アセトニトリルとを30:70
(v/v) の割合に混合する. |
2) |
MAの検出下限は 50 fmolである. |
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【文 献】 |
1. |
高山成明 他.衛生化学 1991;37:14-21. |