| i）誘導体化 |
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| 酢酸エチル層*あるいは溶出液**2) |
| ↓ |
酢酸1滴を添加した後，窒素気流下，0.1 mlまで濃縮する． |
| 濃縮液3) |
| ↓ |
i) 10 ml炭酸ナトリウム/炭酸水素ナトリウム緩衝液（pH 9.0）1.1 ml，1.0 mMダンシルクロリド/アセトン溶液0.9 mlを加え，混和する．
ii) 45℃で1時間加温する． |
| 反応液 |
| ↓ |
直ちに冷水下におき，20 μlをHPLCに注入する． |
| HPLC |
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| 【注 解】 |
| １） |
抽出はガスクロマトグラフィーの項の液-液抽出および固相抽出に従って行う． |
| ２） |
GC，GC/MSの項，液-液抽出の酢酸エチル層あるいは固相抽出の溶出液． |
| ３） |
誘導体化を行わない場合は，乾固した残渣をそのまま移動相に溶解し，分析試料とする．誘導体化を行う場合は，上記の手順をとる． |
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| ii）HPLCの条件（非誘導体化） |
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装置：
検出器：
カラム：
移動相：
カラム温度：
流速：
測定： |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
Finepak SIL C18T1), 25 cm×4.6 mm i.d. 粒径 5 μm
アセトニトリル/0.05 M 酢酸アンモニウム-0.2%酢酸（1:1，v/v）2)
室温
1.0 ml/min
波長 254 nm； 時間 25 min |
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| 【注 解】 |
| １） |
ODS (オクタデシルシラン系シリカゲル)．近年，塩基性化合物専用のカラムや光学分割カラムなど，多種のカラムが市販されており，各社のアプリケーションデータを参考にして使い分けると便利である． |
| ２） |
移動相は，酢酸アンモニウム3.85 gおよび酢酸2 mlに水を加えて1,000 mlにした溶液と，アセトニトリルとを1：1 (v/v) の割合で混合する．移動相として，メタノール系も使用されているが，一般にメタノール系はカラム内圧が高くなるため，カラムの寿命を短くする． |
| ３） |
MAの検出下限は １μg/ml である． |
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| 【文 献】 |
| １． |
高山成明 他．衛生化学 1984；30：14-18. |
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| iii）HPLCの条件（誘導体化） |
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装置：
検出器：
カラム：
移動相：
カラム温度：
流速：
測定： |
高速液体クロマトグラフ
蛍光検出器
Spheri-5RP-18, 3 cm×4.6 mm i.d.（ガードカラム）
＋ Inertsil ODS-2, 25cm×4.6 mm i.d.
アセトニトリル/1 mM イミダゾール液（pH 7.0）（7：3，v/v）1)
室温
1.0 ml/min
波長Ex（励起）470 nm, Em（蛍光）530 nm； 時間 約25 min |
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| 【注 解】 |
| １） |
移動相は，イミダゾール68 mgを水に溶かして1,000 mlとし，酢酸でpHを７に調整する．pHを調整した水溶液と，アセトニトリルとを30：70
(v/v) の割合に混合する． |
| ２） |
MAの検出下限は 50 fmolである． |
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| 【文 献】 |
| １． |
高山成明 他．衛生化学 1991；37：14-21. |
