| i）前処理 |
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| 試料1) 0.5 ml（g） |
| ↓ |
i) 内部標準液2)20 μl，1M K2CO3液3)200 μlを加えて混和する．
ii) クロロホルム3 mlを加える．
iii) 2分間振盪後，1,200回転で5分遠心する． |
| 有機層 |
| ↓ |
窒素気流下，溶媒を留去する． |
| 残渣 |
| ↓ |
移動相100 μlに溶解し，20 μlを注入する． |
| HPLC |
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| 【注 解】 |
| １） |
試料は血清あるいは尿． |
| ２） |
ジアゼパムの20 μg/mlメタノール溶液． |
| ３） |
K2CO3 138 gを水に溶かして1,000 mlにする． |
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| ii）HPLCの条件 |
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装置：
検出器：
カラム：
カラム温度：
移動相：
流速：
測定： |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
TSK-gel Super-ODS，10 cm×4.6 mm i.d.，粒径2 μm（Tosoh）あるいはHypersil ODS-C18，10
cm×4.6 mm i.d.，粒径5 μm（Yokogawa）
室温
メタノール/5mM リン酸ナトリウム緩衝液（pH 6）2) （45：55 v/v）
0.65 ml/min
波長 254 nm； 時間 45 min |
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| 【注 解】 |
| １） |
C18 ODS系のHPLC用カラムで代替可能． |
| ２） |
リン酸（85%，特級）2.91 mlを約800 mlの水で希釈し，pHメーターでモニターしながら，1M NaOH液（40.0 g/l）でpH
6.0に調整後，水を加えて1,000 mlにする． |
| ３） |
ベンゾジアゼピンの保持時間を表２に示す． |
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| 表２．ベンゾジアゼピンの保持時間 |
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| 化 合 物 |
保持時間（分） |
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| Clonazepam |
5.2 |
| Bromazepam |
6.6 |
| Nitrazepam |
9.1 |
| Estazolam |
10.7 |
| Oxazolam |
14.6 |
| Lorazepam |
15.0 |
| Etizolam |
18.4 |
| Chlordiazepoxide |
21.0 |
| Diazepam |
29.8 |
| Flutazolam |
32.2 |
| Haloxazolam |
41.5 |
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| カラム：TSK-gel Super-ODS |
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その他：多くの文献が出ているので，個々の物質についてはそれらを参照． |
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| 【文 献】 |
| １． |
Tanaka E et al. J Chromatogr B. 1996；682：173-178． |
