i)前処理 |
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試料1) |
↓ |
i) 1.0% ライネッケ塩液2)1 mlを加える.
ii) 室温に1時間静置後,遠心分離(1,200 g)する. |
沈渣3) |
↓ |
i) 0.3N HCl 2 mlを加え,水浴上で加温して溶解する..
ii) 0.2M 塩化ニッケル(II)液4) 1 mlおよびトルエン0.5 mlを加える.
iii) 15℃で,2.6M 水素化ホウ素ナトリウム液5) 1 mlを加え,室温で1時間静置する. |
反応液 |
↓ |
ジエチルエーテル各2 mlで4回抽出する. |
有機層 |
↓ |
無水K2CO3を加え,脱水する. |
乾燥有機層 |
↓ |
トリフルオロ酢酸を数滴加えた後,溶媒を減圧下留去する. |
残渣 |
↓ |
i) 内部標準液6)50 μlに溶解する.
ii) 微量の水を加えて混和後,無水K2CO3を少量加え,脱水する. |
酢酸エチル層 |
↓ |
1 μlを注入する. |
GC |
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【注 解】 |
1) |
試料は体液,体組織.血液(1 mlまたはg)に10%トリクロロ酢酸液1.5 mlを加え除蛋白する.除蛋白液を3,000 rpm,10分間遠心分離後,上清を分取する.沈殿部分は10%トリクロロ酢酸液
各1 mlで2回洗浄する (撹拌・遠心・分取).上清液と洗浄液を合わす.尿(1 ml)はそのまま使用する (必要があれば遠沈する). |
2) |
ライネッケ塩一水和物{Reinecke salt monohydrate: NH4[Cr(NCS)4(NH3)2]H2O}1 gを水に溶かし100 mlにする. |
3) |
沈渣を1.0 %ライネッケ塩液1 mlで洗浄する. |
4) |
塩化ニッケル(II)六水和物4.75 gを水に溶かし100 mlにする. |
5) |
水素化ホウ素ナトリウム(sodium borohydride: NaBH4)9.86 gを水に溶かし100 mlにする. |
6) |
内部標準液はキサンテン(xanthene)4 mgを酢酸エチルに溶かし100 mlにする. |
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ii)GCの条件 |
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装置:
検出器:
カラム:
温度:
キャリアガス: |
ガスクロマトグラフ
FID(水素炎イオン化検出器)
5% KOH+5% Apiezon L/Chromosorb W
(AW DMCS,60~80 mesh)1),2 m×3 mm i.d.
カラム 250℃ ; 注入口・検出器 250℃
窒素 30 ml/min 測定時間:18 min |
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【注 解】 |
1) |
カラムは同等品で代替できる. |
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表3.パラコートおよびジクワットの還元誘導体の保持時間 |
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化 合 物 |
保持時間(分) |
定量範囲*(μg/ml) |
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Paraquat還元体 |
4.4 |
1-70 |
Diquat還元体 |
4.8,6.3 |
1-70 |
Xanthene |
8.5 |
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*パラコートジクロライド,ジクワットジブロマイドとして |
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【文 献】 |
1. |
Kawase S et al. J Chromatogr 1984;283:231-240. |