| i）前処理 |
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| 試料1) |
| ↓ |
i) 2N NaOH液でpHを約11に調整する2)．
ii) カートリッジにアプライする． |
| Sep-Pak C18 カートリッジ3),4)（オリジナル，Waters） |
| ↓ |
i) 水3 ml，メタノール3 ml，水5 mlで順次カートリッジを洗浄する．
ii) 0.1N HCl4 mlで溶出する． |
| 溶出液 |
| ↓ |
i) 内部標準液5)100 μlを添加する．
ii) 濃縮操作6)により，乾固する． |
| 残渣 |
| ↓ |
移動相100 μlを加えてとかし，その20 μlを注入する． |
| HPLC |
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| 【注 解】 |
| １） |
試料は体液，体組織．体液（1 mlまたはg）はVortexミキサーで撹拌しながら10％トリクロロ酢酸液1 mlを加え除蛋白する．臓器・組織（1
g）は10％トリクロロ酢酸液5 mlを加えてホモジナイズする．除蛋白液を3,000 rpm，10分間遠心分離後，上清を分取する．沈殿部分は10％トリクロロ酢酸液
各1 mlで2回洗浄する (撹拌・遠心・分取)．上清液と洗浄液を合わす． |
| ２） |
アルカリ性にした後，直ちにSep-Pak C18カートリッジに注入する．パラコート，ジクワットはアルカリ性で分解する．特にジクワットは著しい． |
| ３） |
Sep-Pak C18カートリッジに流すときの流速は5 ml/min以下で行い，カートリッジに空気が入らないように注意する．空気が入ると回収率が低下する． |
| ４） |
Sep-Pak C18カートリッジは各5 mlの水，メタノール，0.1 N HCl，水を順次流し充填剤を予め活性化しておく． |
| ５） |
内部標準液はバニリン酸をメタノールに溶かし，10 μg/mlの溶液とする． |
| ６） |
減圧濃縮乾固，窒素気流下濃縮乾固，凍結乾燥などにより行う． |
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| ii）HPLCの条件 |
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装置：
検出器：
カラム：
カラム温度：
移動相：
流速：
測定： |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
Zorbax C81),25 cm×4.6 mm i.d.，粒径 5 μm
40℃
アセトニトリル/7.5 mM 1-オクタンスルホン酸ナトリウム，
0.1M ジエチルアミンおよび0.2M リン酸を含む溶液2),3)（1：9，v/v）
1.0 ml/min
波長範囲 290 nm； 時間 14 min |
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| 【注 解】 |
| １） |
カラムはODS（オクタデシルシラン系シリカゲル）カラム（μBondapak C18, Inertsil ODS-2など）を使用することもできるが，保持時間やピークの形状などが異なる． |
| ２） |
1-オクタンスルホン酸ナトリウム1.66 g，ジエチルアミン10.4 mlおよびリン酸12.6 mlに水を加えて1,000 mlにしたものをろ過（例えば0.5
μmフィルターを使用）する． |
| ３） |
移動相に加えるイオン対試薬として，オクタンスルホン酸ナトリウムの他に臭化カリウムやトリフルオロ酢酸・パーフルオロ酪酸などを用いた報告がある． |
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| 表1．パラコート，ジクワットおよび内部標準物質の保持時間および定量範囲（標準液） |
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| 化 合 物 |
保持時間（分） |
定量範囲（μg/ml） |
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| Paraquat |
9.0 |
0.1-10.0 |
| Diquat |
6.8 |
0.1-10.0 |
| Vanillic acid |
4.3 |
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| 【文 献】 |
| １． |
福家千昭 他．中毒研究 1992；5：387-393． |
| ２． |
Ito S et al. J Chromatogr 1993；617：119-123． |
| ３． |
Kage S et al. Jpn J Forensic Toxicol 1998；16：34-41． |
