i)前処理 |
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試 料1) |
↓ |
i) 2N NaOH液でpHを約11に調整する2).
ii) カートリッジにアプライする. |
Sep-Pak C18 カートリッジ3),4)(オリジナル,Waters) |
↓ |
i) 水3 ml,メタノール3 ml,水5 mlで順次カートリッジを洗浄する.
ii) 0.1N HCl4 mlで溶出する. |
溶出液 |
↓ |
i) 水を加えて全量を正確に5.0 mlにする.
ii) 発色試薬5) 0.5 mlを加える. |
呈色液6) |
↓ |
セルに入れる. |
分光光度計7-10) |
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【注 解】 |
1) |
試料は体液,体組織.体液(1 mlまたはg)はVortexミキサーで撹拌しながら10%トリクロロ酢酸液1 mlを加え除蛋白する.臓器・組織(1
g)は10%トリクロロ酢酸液5 mlを加えてホモジナイズする.除蛋白液を3,000 rpm,10分間遠心分離後,上清を分取する.沈殿部分は10%トリクロロ酢酸液
各1 mlで2回洗浄する (撹拌・遠心・分取).上清液と洗浄液を合わす. |
2) |
アルカリ性にした後,直ちにSep-Pak C18カートリッジに注入する.パラコート,ジクワットはアルカリ性で分解する.特にジクワットは著しい. |
3) |
Sep-Pak C18カートリッジに流すときの流速は5 ml/min以下で行い,カートリッジに空気が入らないように注意する.空気が入ると回収率が低下する. |
4) |
Sep-Pak C18カートリッジは各5 mlの水,メタノール,0.1 N HCl,水を順次流し充填剤を予め活性化しておく. |
5) |
発色試薬:1 %ハイドロサルファイトナトリウム/1 N NaOH溶液.発色試薬は用時調整し,2時間以内に使用する. |
6) |
呈色はやや不安定で退色する傾向があるため,発色後すみやかに測定する. |
7) |
水5 mlに発色試薬0.5 mlを加えた液を対照として用いる. |
8) |
得られた吸光度を次式により補正する.
パラコートの吸光度補正式:Ep = E600 - (E550 + E650) / 2
E550,E600,E650:550,600,650nmにおける吸光度実測値
ジクワットの吸光度補正式:Ed = E430 - 0.3 x Ep
E430:430 nmにおける吸光度実測値
検量線よりパラコートおよびジクワットのイオン量(μg)を求める. |
9) |
検量線はパラコートおよびジクワット標準液を適宜希釈して得た所定濃度液5 mlに発色試薬0.5 mlを加えて発色させ,補正値より検量線を作成する. |
10) |
検出限界はパラコートで約0.5 μg/ml,ジクワットで約3 μg/mlである. |
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【文 献】 |
1. |
福家 他.中毒研究 1992;5:387-393. |
2. |
パラコート含有除草剤−中毒症状と処置法−,PQ協議会,1995. |