i)前処理(液-液抽出) |
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試料(血清,血漿,全血)1) 1 ml |
↓ |
i) 内部標準溶液2)(50 µg/ml) 0.1 mlと0.2M リン酸一水素二ナトリウム・0.1M クエン酸緩衝液(pH 3.0) 3) 1 mlを加える.
ii) 酢酸エチル3 mlを加えて10分間振盪抽出する.
iii) 3,000 rpmで5分間遠心する. |
酢酸エチル層 |
↓ |
無水硫酸ナトリウムで脱水後,窒素気流下(室温),溶媒を留去する. |
残渣 |
↓ |
移動相100 µlに再溶解し,5 µlを注入する. |
HPLC |
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【注 解】 |
1) |
尿中代謝物(グルクロン酸抱合体・硫酸抱合体)の分析については,ß-グルクロニダーゼ-スルファターゼ処理後に抽出する方法がある. |
2) |
内部標準物質としては、pranoprofenなどのプロピオン酸系解熱鎮痛薬を使用する. |
3) |
A液:0.1 Mクエン酸溶液(クエン酸一水和塩・C6H8O7 H2O)21.0 gを水1,000 mlに溶解,
B液:0.2 Mリン酸一水素二ナトリウム溶液(リン酸一水素二ナトリウム二水和塩・Na2HPO4 2H2O)35.61 gを水1,000 mlに溶解.A液79.45 mlとB液20.55 mlを混合し, pH 3.0に調整する. |
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ii)HPLCの条件 |
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装置:
検出器:
カラム:
カラム温度:
移動相:
流速:
測定: |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
LiChlospher RP18(e), 25 cm X 4.6 mm i.d., 粒径10 µm
室温
メタノール/1N酢酸 (70:30, v/v) 1)
0.4 ml/min
波長254 nm ; 時間10 min |
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【注 解】 |
1) |
解熱鎮痛薬(19種類)の一斉分析に用いられている.本条件下で,アセトアミノフェンの保持時間は5.7 minである.ODS系カラムを使用した分析には,他の移動相として,(1)50
mMリン酸アンモニウム(pH 5.8) /アセトニトリル(85:15, v/v),(2)10 mMリン酸アンモニウム(pH 2.5)/アセトニトリル(4:1,
v/v)などがある. |
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【文 献】 |
1. |
篠塚達雄 他.解熱鎮痛薬試験法.日本薬学会編.薬毒物試験法注解-分析・毒性・対処法-. 東京:東京化学同人; 2006. p.227-238. |
2. |
田中栄之介.アセトアミノフェン(パラセタモール).鈴木修,屋敷幹雄 編.薬毒物分析実践ハンドブック-クロマトグラフィーを中心として-.東京:じほう;2001.p.280-286. |