| i）前処理 |
|
| 試料1) 0.5 ml |
| ↓ |
i) 1N HCl 0.2 ml，内部標準液2)10 μl およびジクロロメタン3 mlを加える．
ii) 2分間撹拌後，遠心分離（800 gで5分間）する． |
| 有機層 |
| ↓ |
スピッツ管に移し，窒素ガス気流で溶媒を留去する． |
| 残渣 |
| ↓ |
移動相100 μl（ＨＰＬＣ）あるいは酢酸エチル100 μlに溶かす3)． |
| HPLC あるいは GC |
|
|
| 【注 解】 |
| １） |
試料は血清，尿など．尿試料の分析では，尿成分のピークの妨害を受けるので，同定には注意すること．尚，全血の分析では下記の論文に記載されているExtrelutやSep-Pak
C18カートリッジカラムによる前処理法が良い． |
| ２） |
内部標準液はフェニトインの500 μg/mlメタノール溶液を使用する． |
| ３） |
HPLCには10-50 μlを，GCには1-2 μlを注入する． |
| ４） |
検量線はブロムワレリル尿素の10 μg/mlメタノール溶液を用いて作成する．このメタノール溶液 (例えば 10，25，50，100，500，1000
μl) を取り，窒素ガス気流 (室温) で溶媒を留去し，残渣に血清 0.5 ml を加えたものを用いる． |
|
|
| ii）HPLCの条件 |
|
|
装置：
検出器：
カラム：
カラム温度：
移動相：
流速：
測定： |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
ODS-80Ts1), 10 cm×4.6 mm i.d. ；粒径 5 μm2)
室温
アセトニトリル/8 mM KH2PO4液（35：65, v/v）3)
0.7 ml/min
波長 225 nm； 時間 15 min |
|
|
|
|
| 【注 解】 |
| １） |
カラムはZorbax ODS，Hypersil ODSなどのODS (オクタデシルシラン系シリカゲル) 同等品で代替できるが，保持時間が異なってくる． |
| ２） |
本法によるブロムワレリル尿素の定量範囲は 0.05-5 μg/ml である．ブロムワレリル尿素および内部標準物質の保持時間はそれぞれ約 7.2分および約12.4分である． |
| ３） |
KH2PO4（リン酸二水素カリウム，99%）770 mgを650 mlの水に溶かした後，アセトニトリル350 mlを加えて1,000 mlにする． |
| ４） |
ブロムワレリル尿素による中毒死の血中レベルについて，菱田らは 44.0-93.8 μg/ml，真口らは67-134 μg/ml，寺田らは他剤と併用
37 μg/ml，松原らは他剤と併用 23.6 μg/ml，屋敷らは他剤と併用 31.5 μg/ml，40.8 μg/ml；単剤114 μg/ml
と報告している． |
| ５） |
試験液 10 μl をHPLCに注入し，得られたクロマトグラムを標準液のそれと比較し，標準液から作成した検量線によって定量を行う． |
|
|
| 【文 献】 |
| １． |
松原和夫 他．衛生化学 1986；32：368-372． |
| ２． |
Miyauchi H et al. J Anal Toxicol 1991；15：123-125． |
| ３． |
菱田 繁．日法医誌 1968；22：577 |
| ４． |
真口孝順．北海道医誌 1961；36：559． |
| ５． |
小嶋 亨 他．日法医誌 1976；30：365-367． |
| ６． |
屋敷幹雄 他．日法医誌 1987；41：452-456． |
