| i）前処理 |
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| 試料1) |
| ↓ |
i) 水2)，N,N-dimethyl-p-phenylenediamine溶液3)0.5 mlおよび50% 塩化第二鉄溶液20 μlを加える．
ii) 直ちに密栓し，短時間振盪後，室温で20分間放置する. |
| 反応液 |
| ↓ |
4,000 gで1分間遠心分離する. |
| 上清 |
| ↓ |
0.45 μmのメンブランフィルターでろ過し，10-20 μlを注入する． |
| HPLC |
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| 【注 解】 |
| １） |
試料は胃内容液，脳など．胃内容液は0.5 ml，脳は予め，0.4 gをとり，20 mM 酢酸亜鉛/1% Briji-35溶液2 mlでホモジナイズし，0.1M
ほう酸緩衝液（pH 12）2.0 mlを加えて希釈したホモジネート1.0 mlを用いる．胃内容液を保存する場合は，胃内容液10 mlに対して5%
酢酸亜鉛溶液0.2 mlを加えておく． |
| ２） |
胃内容液には1.0 ml，脳のホモジネートには0.5 mlを加える． |
| ３） |
N.N-dimethyl-p-phenylenediamine 0.15 gを9M 硫酸1.0 mlに溶解し，9M 硫酸40 mlで希釈する． |
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| ii）HPLCの条件 |
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装置：
検出器：
カラム：
カラム温度：
移動相：
流速：
測定： |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
Hamilton PRP-1, 25 cm×4.6 mm i.d.，粒径 10 μm
ガードカラム付き
室温
アセトニトリル/酢酸/水（35：0.5：64.6, v/ v/v）
1.5 ml/min
波長 660 nm； 時間 10 min |
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| 【注 解】 |
| １） |
メチレンブルーの保持時間は3.9分．（硫化水素との反応により生成したメチレンブルーを分析） |
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| 【文 献】 |
| １． |
Savage JC et al．J Chromatogr B 1990；526：540-545. |
