i)前処理 |
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試料1) |
↓ |
i) 水2),N,N-dimethyl-p-phenylenediamine溶液3)0.5 mlおよび50% 塩化第二鉄溶液20 μlを加える.
ii) 直ちに密栓し,短時間振盪後,室温で20分間放置する. |
反応液 |
↓ |
4,000 gで1分間遠心分離する. |
上清 |
↓ |
0.45 μmのメンブランフィルターでろ過し,10-20 μlを注入する. |
HPLC |
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【注 解】 |
1) |
試料は胃内容液,脳など.胃内容液は0.5 ml,脳は予め,0.4 gをとり,20 mM 酢酸亜鉛/1% Briji-35溶液2 mlでホモジナイズし,0.1M
ほう酸緩衝液(pH 12)2.0 mlを加えて希釈したホモジネート1.0 mlを用いる.胃内容液を保存する場合は,胃内容液10 mlに対して5%
酢酸亜鉛溶液0.2 mlを加えておく. |
2) |
胃内容液には1.0 ml,脳のホモジネートには0.5 mlを加える. |
3) |
N.N-dimethyl-p-phenylenediamine 0.15 gを9M 硫酸1.0 mlに溶解し,9M 硫酸40 mlで希釈する. |
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ii)HPLCの条件 |
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装置:
検出器:
カラム:
カラム温度:
移動相:
流速:
測定: |
高速液体クロマトグラフ
紫外可視検出器
Hamilton PRP-1, 25 cm×4.6 mm i.d.,粒径 10 μm
ガードカラム付き
室温
アセトニトリル/酢酸/水(35:0.5:64.6, v/ v/v)
1.5 ml/min
波長 660 nm; 時間 10 min |
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【注 解】 |
1) |
メチレンブルーの保持時間は3.9分.(硫化水素との反応により生成したメチレンブルーを分析) |
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【文 献】 |
1. |
Savage JC et al.J Chromatogr B 1990;526:540-545. |